一种快速定量测定尿碘的方法

来源：半岛电竞官网app    发布时间：2024-04-26 14:39:48

  碘缺乏与碘过量作为严重危害人类健康的疾病已引起人们的普遍关注，因而准确评价人群碘营养状态尤为重要。人体摄入的碘除了被甲状腺摄取的部分(约50 75 μ g/ L)，其余皆被排出体外，其中80% 85%经尿液排出，因此普遍认为尿碘水平是评价及监测人群碘营养状况的最适指标。目前我国尿碘测定的卫生行业标准方法是过硫酸铵消化-砷铈催化分光光度法， 该方法采用在试管中对样品逐一消化，试剂用量较多，操作过程繁琐，并且对于反应时间要求严格，因此无法实现批量样品的快速测定。国内专利CN 1170147C公开了 “尿碘定量检测试剂盒及尿碘检测方法”，碘标准溶液、尿样经消解后，先加入解析剂或中和剂，再加还原剂进行还原。但是不够简便和灵敏。标准方法因其较高的灵敏度，在尿碘测定中已被广泛用采用，但在该方法中，样品的消化和光催化反应过程需要在试管中逐一进行，不仅导致无法批量测定样品，而且试剂用量大，特别是亚砷酸的较大用量，造成了一定的环境污染。

  本发明的目的是根据上述现状况，旨在提供一种快速、准确定量检测尿中碘含量的方法。本发明定量检测尿中碘含量的方法，包括步骤1、采用12道移液排枪吸取同时吸取不同浓度的7份碘标准系列溶液50 μ L加至 96微孔板的第一排微孔中，然后采用排枪同时吸取12份尿样50 μ L加入微孔板的第二排微孔中，同样吸取另四批尿样(每批12份)50 μ L分别置于微孔板的第三、四、五、六排微孔中，然后用排枪于加样微孔中加入100μ L的过硫酸铵。2、将微孔板密封后置于100°C的恒温干燥箱中消化60min。3、消化后将密封盒的底部用自来水冷却至室温，防止微孔板凹槽上部的水蒸气凝结，同时终止消化。4、将冷却后的密封板打开，加入100μ L的亚砷酸溶液混勻，然后用排枪每排间隔 30s，快速加入50 μ L的硫酸铈铵溶液。5、反应混合物在室温下(27。C )反应10分钟后，采用酶标仪每排间隔30s读出各孔中溶液在420nm处的吸光度数值。本发明的优点及效果1、本发明将96微孔板作为消化容器和催化反应容器，同时利用12道移液排枪进行试剂的批次移加，酶标仪进行多个样品吸光度的同时测定，大幅度减少了测定试剂用量、 缩短了测定时间、简化了操作程序，对提高尿碘检测的效率、降低检测成本。

  2、本发明采用耐热性和化学惰性良好的聚丙烯微孔板作为消化容器和催化反应容器，利用自制的密封板，防止微孔板中水蒸气漏出和样品的交叉污染；同时采用酶标仪同时测定多份样品的吸光度，实现了微量样本的批量测定。

  具体实施例方式下面结合具体实施例对本发明作进一步说明，但所举实施例不作为对本发明的限定。若未特别指明，实施例中所用的技术手段为本领域技术人员所熟知的常规手段。实施例1标准曲线及样品测试本发明定量检测尿中碘含量的方法，包括步骤1、采用12道移液排枪吸取同时吸取不同浓度的7份碘标准系列溶液50 μ L加至 96微孔板的第一排微孔中，然后采用排枪同时吸取12份尿样50 μ L加入微孔板的第二排微孔中，同样吸取另四批尿样(每批12份)50 μ L分别置于微孔板的第三、四、五、六排微孔中，然后用排枪于加样微孔中加入100μ L的过硫酸铵。2、将微孔板密封后置于100°C的恒温干燥箱中消化60min。3、消化后将密封盒的底部用自来水冷却至室温，防止微孔板凹槽上部的水蒸气凝结，同时终止消化。4、将冷却后的密封板打开，加入100μ L的亚砷酸溶液混勻，然后用排枪每排间隔 30s，快速加入50 μ L的硫酸铈铵溶液。5、反应混合物在室温下(27。C )反应10分钟后，采用酶标仪每排间隔30s读出各孔中溶液在420nm处的吸光度数值。同批次进行标准曲线份样品测试。结果表明在0-300 μ g//L碘浓度范围内，标准曲线gA, R = O. 9985。60例尿碘含量测定平均值为132 μ g/L。按标准方法，对60例样品在试管中逐一消化后，用分光光度计测定，测得尿碘含量平均值1 μ g/L。将微孔板批量测定的结果(Y)与标准方法的测定结果(X)进行对照， 得回归方程为γ= 1. 0077X-3. 6998，R = 0. 9902，经t检验，P 0. 05，两者无显著性差异。实施例2回收率将已测得尿碘浓度为102 μ g/L的尿液标本分别加入50 μ g/L、100 μ g/L、150 μ g/ L的碘酸钾标溶液，按本实验方法进行回收实验，得回收率分别为93.3 %、105. 9%和 96. 6%，平均回收率为98. 6%。实施例3精密度批内精密度分别取高碘浓度056 μ g/L)的尿液标本、中等碘浓度(152 μ g/L)的尿液标本、低碘浓度的尿液样本(49 μ g/L)，每个尿样标本平行取12份，在微孔板中同一批次进行测定。得高、中、低样品的平均变异系数(00分别为3.35%、2.32%和5.61(%。批间精密度取浓度(152yg/L)的尿液标本连续测定3天，每天3次，得批间平均变异系数为 4. 50%。实施例4气密性实验分别称量出微孔板的质量、微孔板和密封硅胶膜总质量；然后在每微孔板的每个加样孔中加入150 μ L水，称量加样后的微孔板质量、加样微孔板和密封硅胶膜的总质量；接着将加样后的微孔板密封，置于100°C恒干燥箱中加热60min ；自然冷却至室温后，分别称量加样微孔板的质量、加样微孔板和密封膜的总质量。测得实验数据为表1微孔板、微孔板与硅胶膜在各阶段的质量(g)

  微孔板及密封膜微孔板加样前加样后加热冷却后加样前加样后加热冷却后51.7255 65.8782 65.865646.631360.787054.3930通过表中数据分别计算加热前后水分质量，根据如下公式，计算水分残留率。

  加热前水分质量实施例5交叉污染实验采用两个相同型号的微孔板，一个作为对照板，一个作为实验板，进行交叉污染实验。具体方法如下对照板中，将系列标准液取50μ L每间隔一个加入到微孔中；实验板中， 标准液加入到与对照板相同的微孔中，间隔的微孔中加入50 μ L由标准溶液和尿液配制的混合溶液。混合溶液由0. IOmL浓度为100 μ g/L的碘标准溶液和0. 90mL尿液混合而成。按照实施例1方法，测定标准系列微孔中的吸光度数值，分别绘制对照板和实验板的标准曲线。得对照板的标准曲线实验板的标准曲线gA, R = O. 9985。实验中发现标准系列溶液的吸光度数值为0. 900-0. 170之间，假定吸光度数值如下表中所示，分别采用对照板和实验板所得的标准曲线计算得碘含量数据如下，从表中结果可知，两条标准曲线的计算结果吻合，说明测定过程中不存在交叉污染。表2对照板和标准板标准曲线方程对应不同吸光度的尿碘计算结果

  1. 一种快速定量测定尿碘的方法，其特征在于具体步骤如下(1)采用12道移液排枪吸取同时吸取不同浓度的7份碘标准系列溶液50μ L加至96 微孔板的第一排微孔中，然后采用排枪同时吸取12份尿样50 μ L加入微孔板的第二排微孔中，同样吸取另四批尿样(每批12份)50 μ L分别置于微孔板的第三、四、五、六排微孔中， 然后用排枪于加样微孔中加入100 μ L的过硫酸铵。(2)将微孔板密封后置于100°C的恒温干燥箱中消化60min。(3)消化后将密封盒的底部用自来水冷却至室温，防止微孔板凹槽上部的水蒸气凝结， 同时终止消化。(4)将冷却后的密封板打开，加入IOOyL的亚砷酸溶液混勻，然后用排枪每排间隔 30s，快速加入50 μ L的硫酸铈铵溶液。(5)反应混合物在室温下(27°C)反应10分钟后，采用酶标仪每排间隔30s读出各孔中溶液在420nm处的吸光度数值。

  本发明采用耐热性和化学惰性良好的聚丙烯微孔板作为消化容器和催化反应容器，利用自制的密封板，防止微孔板中水蒸气漏出和样品的交叉污染；同时采用酶标仪同时测定多份样品的吸光度，实现了微量样本的批量测定。本发明方法的建立大大的节省了试剂用量，极大缩短了测定时间，减轻了测定的工作量，非常适用于大批量样品的测定。本发明方法仪器结构更简单、分析成本更低廉，且分析效率略高于自动分析方法。

  发明者丁钢强, 刘佳明, 吕建新, 曹建明, 楼晓明, 楼永良, 赵长容, 郑美琴 申请人:温州医学院

  技术研发人员：吕建新;曹建明;楼永良;楼晓明;丁钢强;赵长容;郑美琴;刘佳明

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